Massaspectrometrie bij peptiden uitgelegd

Μαζική φασματομετρία σε πεπτίδια εξηγημένη

Φασματομετρία μάζας στα πεπτίδια: πώς διερευνάται η μοριακή ταυτότητα;

Κατά τον ποιοτικό έλεγχο ερευνητικών πεπτιδίων, συχνά συνδυάζονται πολλές αναλυτικές τεχνικές. Η HPLC μπορεί να παρέχει πληροφορίες σχετικά με τη χρωματογραφική καθαρότητα, αλλά μια υψηλή κύρια κορυφή δεν αποδεικνύει αυτόματα ότι υπάρχει το σωστό πεπτίδιο.

Για την περαιτέρω διερεύνηση της μοριακής ταυτότητας, χρησιμοποιείται συχνά η φασματομετρία μάζας.

Η φασματομετρία μάζας, που συνήθως συντομογραφείται ως MS, είναι μια αναλυτική τεχνική με την οποία μετράται ο λόγος μάζας προς φορτίο των ιονισμένων μορίων. Στην ανάλυση πεπτιδίων, η μετρούμενη μοριακή μάζα μπορεί να συγκριθεί με τη θεωρητικά αναμενόμενη μάζα της αλληλουχίας αμινοξέων.

Όταν αυτές οι τιμές συμφωνούν, αυτό υποστηρίζει την ταυτοποίηση του υπό εξέταση πεπτιδίου. Ωστόσο, ούτε η φασματομετρία μάζας παρέχει από μόνη της πλήρη εικόνα της ποιότητας.

Σε αυτό το άρθρο εξετάζουμε πώς λειτουργεί η φασματομετρία μάζας, γιατί τα πεπτίδια μπορούν να παράγουν πολλαπλά σήματα μάζας και πώς ερμηνεύονται τα αποτελέσματα MS σε συνδυασμό με HPLC και άλλες αναλυτικές μεθόδους.


Τι είναι η φασματομετρία μάζας;

Η φασματομετρία μάζας είναι μια αναλυτική τεχνική με την οποία τα μόρια μετατρέπονται σε φορτισμένα σωματίδια, δηλαδή ιόντα.

Στη συνέχεια, τα ιόντα αυτά διαχωρίζονται και μετρώνται με βάση τον λόγο μάζας προς φορτίο.

Ο λόγος αυτός εκφράζεται ως:

m/z

Εδώ:

  • m για τη μάζα·
  • z για το ηλεκτρικό φορτίο.

Επομένως, ένα φασματόμετρο μάζας δεν μετρά πάντα άμεσα ολόκληρη τη μοριακή μάζα. Το όργανο μετρά τον λόγο μάζας προς φορτίο.

Στα μεγαλύτερα μόρια, συμπεριλαμβανομένων πολλών πεπτιδίων, μπορούν να προκύψουν πολλαπλά φορτία. Έτσι, το ίδιο πεπτίδιο μπορεί να εμφανίζεται σε διαφορετικές θέσεις στο φάσμα μάζας.


Γιατί χρησιμοποιείται η φασματομετρία μάζας στην ανάλυση πεπτιδίων;

Ένα πεπτίδιο αποτελείται από μια συγκεκριμένη αλληλουχία αμινοξέων.

Κάθε συνδυασμός αμινοξέων έχει μια θεωρητικά υπολογίσιμη μοριακή μάζα.

Η φασματομετρία μάζας μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να εξεταστεί αν η μετρούμενη μάζα αντιστοιχεί σε αυτή τη θεωρητική τιμή.

Η ανάλυση MS μπορεί να συμβάλει στα εξής:

  • επιβεβαίωση της μοριακής ταυτότητας·
  • σύγκριση με τη θεωρητική μοριακή μάζα·
  • ανίχνευση συγκεκριμένων χημικών τροποποιήσεων·
  • ανάλυση προϊόντων αποδόμησης·
  • διερεύνηση παραλλαγών πεπτιδίων·
  • σύγκριση μεταξύ παρτίδων παραγωγής.

Μια αντίστοιχη μάζα υποστηρίζει την ταυτοποίηση ενός πεπτιδίου.

Ωστόσο, το αποτέλεσμα πρέπει πάντα να αξιολογείται σε συνδυασμό με τη μέθοδο ανάλυσης και άλλα δεδομένα ποιότητας.


Ποια είναι η θεωρητική μοριακή μάζα;

Η θεωρητική μοριακή μάζα υπολογίζεται με βάση:

  • η αλληλουχία αμινοξέων·
  • ο αριθμός των αμινοξέων·
  • τυχόν χημικές τροποποιήσεις·
  • η μοριακή διαμόρφωση·
  • συγκεκριμένες τελικές ομάδες.

Όταν τα αμινοξέα σχηματίζουν μαζί μια πεπτιδική αλυσίδα, δημιουργούνται πεπτιδικοί δεσμοί.

Κατά τον σχηματισμό κάθε πεπτιδικού δεσμού, αποσπάται ένα μόριο νερού. Επομένως, η μάζα ενός πλήρους πεπτιδίου δεν είναι απλώς το άθροισμα όλων των μεμονωμένων αμινοξέων.

Οι τροποποιήσεις μπορούν επίσης να επηρεάσουν τη μάζα.

Παραδείγματα είναι:

  • αμίδωση·
  • ακετυλίωση·
  • φωσφορυλίωση·
  • οξείδωση·
  • προσθήκη λιπαρών αλυσίδων·
  • σχηματισμός δισουλφιδικών γεφυρών.

Επομένως, η θεωρητική μάζα πρέπει να υπολογίζεται για την ακριβή μοριακή δομή.


Τι σημαίνει μοριακό βάρος;

Οι όροι μοριακή μάζα και μοριακό βάρος χρησιμοποιούνται συχνά εναλλακτικά.

Σε εργαστηριακές αναφορές, η τιμή εκφράζεται συνήθως σε:

  • ντάλτον, συντομογραφία Da·
  • κιλο-ντάλτον, συντομογραφία kDa.

Ένα ντάλτον αντιστοιχεί περίπου στη μάζα ενός ατόμου υδρογόνου.

Ένα πεπτίδιο με μοριακή μάζα 3.000 Da έχει επομένως μάζα περίπου 3 kDa.

Η μοριακή μάζα των πεπτιδίων μπορεί να διαφέρει σημαντικά, ανάλογα με:

  • μήκος αλυσίδας·
  • σύσταση αμινοξέων·
  • χημικές τροποποιήσεις.

Πώς λειτουργεί ένα φασματόμετρο μάζας;

Ένα φασματόμετρο μάζας αποτελείται συνήθως από διάφορα μέρη.

1. Εισαγωγή δείγματος

Το πεπτίδιο προετοιμάζεται αρχικά και εισάγεται στο όργανο.

Η προετοιμασία του δείγματος μπορεί να επηρεάσει:

  • θόρυβος υποβάθρου·
  • ανιχνευσιμότητα·
  • σχηματισμός ιόντων·
  • σήματα υποβάθρου.

2. Ιονισμός

Τα μόρια φορτίζονται ηλεκτρικά.

Συχνά χρησιμοποιούμενες τεχνικές για την ανάλυση πεπτιδίων είναι:

  • ιονισμός με ηλεκτροψεκασμό·
  • αποεκρόφηση/ιονισμός με υποβοήθηση μήτρας και λέιζερ.

3. Ανάλυση μάζας

Τα σχηματισμένα ιόντα διαχωρίζονται με βάση τον λόγο μάζας προς φορτίο.

4. Ανίχνευση

Ο ανιχνευτής καταγράφει τα ιόντα.

5. Επεξεργασία δεδομένων

Τα μετρούμενα σήματα μετατρέπονται σε φάσμα μάζας.

Αυτό το φάσμα περιέχει κορυφές που αντιστοιχούν στα ανιχνευμένα ιόντα.


Τι είναι ο ιονισμός με ηλεκτροψεκασμό;

Ιονισμός με ηλεκτροψεκασμό, συντομογραφία ESI, είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη τεχνική ιονισμού για πεπτίδια.

Tijdens ESI wordt een vloeibaar monster door een fijne opening geleid terwijl een elektrische spanning wordt aangebracht.

Hierdoor ontstaan elektrisch geladen druppeltjes.

Wanneer het oplosmiddel verdampt, blijven geladen moleculen over.

Een belangrijk kenmerk van ESI is dat grotere moleculen meerdere elektrische ladingen kunnen krijgen.

Een peptide kan bijvoorbeeld voorkomen als:

  • [M+H]⁺;
  • [M+2H]²⁺;
  • [M+3H]³⁺.

Hierbij staat M voor de moleculaire massa van de peptide.

Door meerdere ladingen ontstaan verschillende m/z-signalen voor dezelfde molecule.


Waarom heeft één peptide meerdere pieken?

Wanneer een peptide meerdere protonen opneemt, ontstaan verschillende ladingsvormen.

Stel dat een peptide een moleculaire massa heeft van ongeveer 3.000 Da.

Mogelijke signalen zijn dan ongeveer:

  • ένα θετικό φορτίο: m/z περίπου 3.001·
  • δύο θετικά φορτία: m/z περίπου 1.501·
  • τρία θετικά φορτία: m/z περίπου 1.001.

Όλα αυτά τα σήματα μπορεί να αντιστοιχούν στο ίδιο πεπτίδιο.

Το λογισμικό μπορεί να χρησιμοποιήσει αυτή την κατανομή φορτίου για να υπολογίσει την αρχική μοριακή μάζα.

Αυτή η διαδικασία ονομάζεται αποσυνέλιξη.


Τι είναι ένα αποσυζευγμένο φάσμα μάζας;

Μια ακατέργαστη μέτρηση ESI μπορεί να περιέχει πολλαπλές κορυφές φορτίου.

Αυτό μπορεί να κάνει την ερμηνεία πιο σύνθετη.

Με λογισμικό αποσυνέλιξης, οι διάφορες μορφές φορτίου μετατρέπονται σε μία εκτιμώμενη μοριακή μάζα.

Έτσι, το αποσυζευγμένο φάσμα μπορεί να συγκριθεί ευκολότερα με:

  • τη θεωρητική μάζα·
  • ένα πρότυπο αναφοράς·
  • προδιαγραφές του προϊόντος.

Η ποιότητα του υπολογισμού εξαρτάται από:

  • θόρυβος υποβάθρου·
  • ανάλυση·
  • ένταση σήματος·
  • ρυθμίσεις λογισμικού·
  • παρουσία επικαλυπτόμενων συστατικών.

Τι είναι η MALDI;

Η υποβοηθούμενη από μήτρα εκρόφηση/ιονισμός με λέιζερ, που συντομογραφείται ως MALDI, είναι μια άλλη τεχνική ιονισμού.

Το πεπτίδιο αναμειγνύεται με ένα υλικό μήτρας και τοποθετείται σε μια πλάκα μέτρησης.

Ένα λέιζερ ενεργοποιεί τη μήτρα, με αποτέλεσμα να σχηματίζονται ιόντα πεπτιδίων.

Η MALDI παράγει συχνά κυρίως μονοφορτισμένα ιόντα.

Έτσι, το φάσμα μπορεί να φαίνεται απλούστερο από ένα φάσμα ESI.

Η MALDI συνδυάζεται συχνά με έναν αναλυτή μάζας χρόνου πτήσης.

Ο συνδυασμός αυτός ονομάζεται:

MALDI-TOF


Τι είναι ο χρόνος πτήσης;

Σε έναν αναλυτή μάζας χρόνου πτήσης, τα ιόντα επιταχύνονται από ένα ηλεκτρικό πεδίο.

Στη συνέχεια, κινούνται μέσα από έναν σωλήνα μέτρησης.

Τα ιόντα με χαμηλότερο λόγο μάζας προς φορτίο φτάνουν συνήθως στον ανιχνευτή γρηγορότερα από τα ιόντα με υψηλότερο λόγο.

Ο χρόνος πτήσης χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό της τιμής m/z.

Τα συστήματα TOF μπορούν να χρησιμοποιηθούν για:

  • ταυτοποίηση πεπτιδίων·
  • προσδιορισμός μάζας·
  • σύγκριση μοριακών παραλλαγών.

Η τελική ακρίβεια εξαρτάται από τη βαθμονόμηση, τις ρυθμίσεις του οργάνου και την προετοιμασία του δείγματος.


Τι είναι η LC-MS;

Η υγρή χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας, που συντομογραφείται ως LC-MS, συνδυάζει την υγρή χρωματογραφία με τη φασματομετρία μάζας.

Τα συστατικά διαχωρίζονται αρχικά χρωματογραφικά.

Στη συνέχεια, τα επιμέρους σήματα αναλύονται από το φασματόμετρο μάζας.

Η LC-MS μπορεί να συνδυάσει πληροφορίες σχετικά με:

  • χρόνος κατακράτησης·
  • χρωματογραφικό προφίλ·
  • μοριακή μάζα·
  • πιθανές προσμείξεις·
  • προϊόντα αποδόμησης.

Έτσι, η LC-MS μπορεί να προσφέρει περισσότερες πληροφορίες από μια μεμονωμένη ανάλυση HPLC ή MS.


Ποια είναι η διαφορά μεταξύ HPLC και φασματομετρίας μάζας;

Η HPLC και η φασματομετρία μάζας απαντούν σε διαφορετικά αναλυτικά ερωτήματα.

HPLC

Η HPLC μπορεί να παρέχει πληροφορίες σχετικά με:

  • ακριβής ποσότητα;
  • σχετική ποσότητα των ανιχνευμένων συστατικών·
  • χρόνοι κατακράτησης·
  • μεταβολές στο χρωματογραφικό προφίλ.

Φασματομετρία μάζας

Η φασματομετρία μάζας μπορεί να παρέχει πληροφορίες σχετικά με:

  • μοριακή μάζα·
  • πιθανή ταυτότητα·
  • χημικές τροποποιήσεις·
  • ορισμένα προϊόντα αποδόμησης.

Μια απλοποιημένη σύγκριση:

Αναλυτικό ερώτημα HPLC Φασματομετρία μάζας
Πόσα χρωματογραφικά συστατικά είναι ορατά; Ναι Περιορισμένα
Ποια είναι η σχετική κύρια κορυφή; Ναι Όχι πρωτίστως
Συμφωνεί η μάζα με το αναμενόμενο πεπτίδιο; Όχι Ναι
Μπορεί να υποστηριχθεί η ταυτότητα; Περιορισμένα Ναι
Προσδιορίζεται η ακριβής ποσότητα στο φιαλίδιο; Όχι αυτόματα Όχι αυτόματα
Εξετάζεται η στειρότητα; Όχι Όχι

Γι’ αυτό οι δύο τεχνικές συχνά συνδυάζονται.


Μπορεί να εμφανίζεται η ίδια μοριακή μάζα σε διαφορετικά πεπτίδια;

Ναι.

Διαφορετικές αλληλουχίες αμινοξέων μπορεί να έχουν την ίδια ή σχεδόν την ίδια συνολική μάζα.

Αυτές ονομάζονται μερικές φορές ισοβαρείς δομές.

Επομένως, μια αντίστοιχη μάζα δεν αποδεικνύει πάντα ότι ολόκληρη η αλληλουχία αμινοξέων είναι σωστή.

Για πιο εκτενή ταυτοποίηση μπορεί να χρειαστούν συμπληρωματικές τεχνικές, όπως:

  • φασματομετρία μάζας διαδοχικής ανάλυσης·
  • ανάλυση θραυσμάτων·
  • ανάλυση αμινοξέων·
  • ανάλυση αλληλουχίας·
  • σύγκριση με πρότυπο αναφοράς.

Η απαιτούμενη αναλυτική μέθοδος εξαρτάται από τον επιθυμητό βαθμό βεβαιότητας.


Τι είναι η φασματομετρία μάζας διαδοχικής ανάλυσης;

Η φασματομετρία μάζας διαδοχικής ανάλυσης γράφεται συνήθως ως:

MS/MS

Κατά το MS/MS, ένα επιλεγμένο ιόν πεπτιδίου θραυσματοποιείται περαιτέρω.

Στη συνέχεια, τα σχηματισμένα θραύσματα μετρώνται ξανά.

Το πρότυπο θραυσματοποίησης μπορεί να παρέχει πληροφορίες σχετικά με:

  • αλληλουχία αμινοξέων·
  • θέση τροποποιήσεων·
  • ταυτότητα πεπτιδίου·
  • δομή προϊόντων αποδόμησης.

Έτσι, το MS/MS μπορεί να παρέχει περισσότερες πληροφορίες για τη δομή από ό,τι μόνο η άθικτη μοριακή μάζα.


Τι είναι τα θραύσματα πεπτιδίων;

Όταν μια πεπτιδική αλυσίδα διασπάται σε συγκεκριμένες θέσεις κατά τη διάρκεια MS/MS, σχηματίζονται ιόντα θραυσμάτων.

Συνήθεις τύποι θραυσμάτων είναι:

  • ιόντα b·
  • ιόντα y.

Οι μάζες αυτών των θραυσμάτων μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την ανακατασκευή τμημάτων της αλληλουχίας αμινοξέων.

Η ερμηνεία μπορεί να είναι σύνθετη.

Δεν θραυσματοποιείται κάθε πεπτίδιο με τον ίδιο τρόπο.

Οι παράγοντες που μπορεί να επηρεάσουν είναι:

  • σύσταση αμινοξέων·
  • ηλεκτρικό φορτίο·
  • μέγεθος πεπτιδίου·
  • μέθοδος θραυσματοποίησης·
  • χημικές τροποποιήσεις.

Μπορεί η φασματομετρία μάζας να ανιχνεύσει οξείδωση;

Ορισμένες οξειδωτικές μεταβολές προκαλούν μετρήσιμη αλλαγή μάζας.

Για παράδειγμα, η προσθήκη ενός ατόμου οξυγόνου οδηγεί συχνά σε αύξηση της μάζας κατά περίπου 16 Da.

Έτσι, η φασματομετρία μάζας μπορεί να βοηθήσει στην ταυτοποίηση ορισμένων προϊόντων οξείδωσης.

Η ανίχνευση εξαρτάται από:

  • συγκέντρωση·
  • διακριτική ικανότητα του οργάνου·
  • αναλυτική μέθοδος·
  • διαχωρισμός συστατικών.

Δεν μπορούν να εντοπιστούν πλήρως όλες οι οξειδωτικές μεταβολές αποκλειστικά με βάση ένα μόνο σήμα μάζας.

Για τον σκοπό αυτό μπορεί να χρειαστεί συμπληρωματική ανάλυση θραυσμάτων.


Μπορεί η φασματομετρία μάζας να προσδιορίσει την ποσότητα πεπτιδίου;

Όχι αυτόματα.

Η ένταση ενός σήματος μάζας επηρεάζεται από:

  • αποδοτικότητα ιονισμού·
  • μοριακές ιδιότητες·
  • διαλύτης·
  • ρυθμίσεις του οργάνου·
  • παρουσία άλλων συστατικών.

Επομένως, ένα σήμα διπλάσιας έντασης δεν σημαίνει αυτόματα ότι υπάρχει διπλάσια ποσότητα πεπτιδίου.

Για αξιόπιστη ποσοτικοποίηση απαιτούνται επικυρωμένες μέθοδοι και κατάλληλα πρότυπα.

Πιθανές τεχνικές είναι:

  • ποσοτική LC-MS·
  • εσωτερικά πρότυπα·
  • ισοτοπικά επισημασμένα πρότυπα αναφοράς·
  • βαθμονομημένες δοκιμές HPLC.

Μπορεί η φασματομετρία μάζας να αποδείξει τη στειρότητα;

Όχι.

Η φασματομετρία μάζας για την ταυτοποίηση πεπτιδίων δεν αποτελεί δοκιμή στειρότητας.

Το αποτέλεσμα δεν παρέχει άμεσες πληροφορίες σχετικά με:

  • βακτήρια·
  • μύκητες·
  • μικροβιακή ανάπτυξη·
  • στειρότητα του προϊόντος.

Η στειρότητα απαιτεί ειδικές μικροβιολογικές μεθόδους δοκιμών.

Ούτε οι ενδοτοξίνες προσδιορίζονται αυτόματα κατά τη διάρκεια μιας τυπικής ανάλυσης MS πεπτιδίων.


Μπορεί η φασματομετρία μάζας να μετρήσει ενδοτοξίνες;

Όχι μέσω τυπικής ανάλυσης ταυτότητας.

Οι ενδοτοξίνες είναι σύνθετα βακτηριακά συστατικά.

Για την ανίχνευση ενδοτοξινών χρησιμοποιούνται ειδικές μέθοδοι, όπως:

  • δοκιμή Lysate Αμοιβοκυττάρων Limulus·
  • μέθοδοι ανασυνδυασμένου παράγοντα C.

Επομένως, ένα σωστό φάσμα μάζας ενός πεπτιδίου δεν αποδεικνύει ότι το υλικό έχει χαμηλή περιεκτικότητα σε ενδοτοξίνες.

Η ταυτότητα, η καθαρότητα, η στειρότητα και οι ενδοτοξίνες είναι ξεχωριστές παράμετροι ποιότητας.


Γιατί μπορεί να διαφέρουν τα εργαστηριακά αποτελέσματα;

Διαφορετικά εργαστήρια μπορεί να αναφέρουν ελαφρώς αποκλίνουσες τιμές μάζας.

Πιθανές αιτίες είναι:

  • τύπος οργάνου·
  • βαθμονόμηση·
  • μέθοδος ιονισμού·
  • προετοιμασία δείγματος·
  • προσθετικά ιόντα αλάτων·
  • χρησιμοποιούμενο λογισμικό·
  • ανάλυση·
  • μέθοδος ερμηνείας.

Οι μικρές διαφορές δεν σημαίνουν αυτόματα ότι ένα αποτέλεσμα είναι εσφαλμένο.

Η μετρούμενη τιμή πρέπει να αξιολογείται εντός των ορίων της:

  • ακρίβεια του οργάνου·
  • αναμενόμενη μοριακή μορφή·
  • χρησιμοποιούμενη μέθοδος ανάλυσης.

Τι είναι τα προσθετικά ιόντα;

Κατά τη φασματομετρία μάζας, τα ιόντα πεπτιδίων μπορούν να συνδεθούν με άλλα φορτισμένα σωματίδια.

Παραδείγματα είναι:

  • νάτριο·
  • κάλιο·
  • αμμώνιο.

Έτσι μπορεί να προκύψουν πρόσθετες κορυφές.

Για παράδειγμα, ένα προσθετικό ιόν νατρίου έχει διαφορετική μάζα από ένα απλά πρωτονιωμένο ιόν πεπτιδίου.

Τα προσθετικά ιόντα δεν σημαίνουν αυτόματα ότι υπάρχει διαφορετικό πεπτίδιο.

Η ερμηνεία απαιτεί γνώση των εξής:

  • προετοιμασία δείγματος·
  • χρησιμοποιούμενα ρυθμιστικά διαλύματα·
  • αναμενόμενες μορφές ιόντων.

Ποιες πληροφορίες περιλαμβάνει μια έκθεση MS;

Μια επαγγελματική αναλυτική έκθεση μπορεί, μεταξύ άλλων, να περιλαμβάνει:

  • όνομα του πεπτιδίου·
  • αριθμός παρτίδας ή lot·
  • θεωρητική μοριακή μάζα·
  • μετρούμενη μοριακή μάζα·
  • μέθοδος ιονισμού·
  • τύπος φασματόμετρου μάζας·
  • φάσμα μάζας·
  • ημερομηνία ανάλυσης·
  • όνομα του εργαστηρίου.

Σε εκτενέστερη ανάλυση μπορούν επίσης να αναφέρονται:

  • εύρος μέτρησης·
  • ανάλυση·
  • ακρίβεια μάζας·
  • δεδομένα θραυσματοποίησης·
  • χρησιμοποιούμενο λογισμικό.

De benodigde rapportage hangt af van het onderzoeksdoel.


Η απαιτούμενη αναφορά εξαρτάται από τον ερευνητικό στόχο.

Φασματομετρία μάζας και έλεγχος παρτίδων

Κάθε παρτίδα παραγωγής μπορεί να εξετάζεται ξεχωριστά.

  • Η ειδική για την παρτίδα ανάλυση MS υποστηρίζει:
  • έλεγχος ταυτότητας;
  • σύγκριση μεταξύ παρτίδων;
  • ιχνηλασιμότητα;

έρευνα αποκλίσεων.

Ο αριθμός παρτίδας στην έκθεση ανάλυσης πρέπει να αντιστοιχεί στην αναγνώριση του φιαλιδίου.


Ένα φασματομετρικό αποτέλεσμα χωρίς σαφή σύνδεση με την παρτίδα έχει περιορισμένη αξία για την ιχνηλασιμότητα.

Επιστημονικοί περιορισμοί

Η φασματομετρία μάζας είναι μια ισχυρή αναλυτική τεχνική, αλλά όχι μια πλήρης αξιολόγηση ποιότητας.

  • Η αντίστοιχη μοριακή μάζα δεν αποδεικνύει αυτόματα:
  • πλήρης αλληλουχία αμινοξέων;
  • υψηλή χρωματογραφική καθαρότητα;
  • χρωματογραφική καθαρότητα;
  • σωστή ποσότητα πεπτιδίου;
  • χαμηλή περιεκτικότητα σε ενδοτοξίνες;
  • βιολογική δραστικότητα;

μακροχρόνια σταθερότητα.

  • Για μια ευρύτερη αξιολόγηση μπορεί να απαιτούνται πολλαπλές μέθοδοι:
  • MALDI-TOF;
  • HPLC;
  • MS/MS;
  • ποσοτική δοκιμή;
  • μελέτη σταθερότητας;
  • ανάλυση υγρασίας;

πρόσθετες ειδικές για το προϊόν δοκιμές.


Τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται συνολικά.

Περίληψη

Η φασματομετρία μάζας χρησιμοποιείται για τη διερεύνηση της μοριακής μάζας των ερευνητικών πεπτιδίων.

Η τεχνική μετρά τον λόγο μάζας προς φορτίο των ιονισμένων μορίων.

Στην ανάλυση πεπτιδίων, η μετρούμενη μάζα μπορεί να συγκριθεί με τη θεωρητικά αναμενόμενη μάζα.

Μια συμφωνία υποστηρίζει τη μοριακή ταυτοποίηση.

  • Σημαντικές αναλυτικές τεχνικές είναι:
  • ESI-MS;
  • MALDI-TOF;
  • LC-MS;

MS/MS.

  • Ωστόσο, η φασματομετρία μάζας δεν παρέχει αυτόματα πληροφορίες σχετικά με:
  • ακριβής ποσότητα;
  • χρωματογραφική καθαρότητα;
  • ενδοτοξίνες;
  • βιολογική δραστικότητα.

Γι’ αυτό η MS συχνά συνδυάζεται με HPLC και πρόσθετες αναλύσεις ποιότητας.


Αποποίηση ευθύνης για ερευνητική χρήση

Τα ερευνητικά πεπτίδια της Peptidera προσφέρονται αποκλειστικά για Research Use Only (RUO) και προορίζονται για εργαστηριακή έρευνα και αναλυτικές εφαρμογές.

Δεν προορίζεται για κατανάλωση από ανθρώπους ή ζώα, διαγνωστική χρήση, θεραπευτική εφαρμογή ή αυτοχορήγηση.


Κατηγορία:
Γνώση πεπτιδίων & ποιοτικός έλεγχος

Σχετικά προϊόντα της Peptidera:
Λυοφιλοποιημένα ερευνητικά πεπτίδια με αναγνώριση παρτίδας και διαθέσιμα αναλυτικά δεδομένα ποιότητας

Σχετικά εσωτερικά ιστολόγια:

  • PB-0227 — Λυοφιλοποιημένα πεπτίδια και λυοφιλοποίηση
  • PB-0228 — Φιαλίδια πεπτιδίων και ακεραιότητα συσκευασίας
  • PB-0229 — Αριθμοί παρτίδων και ιχνηλασιμότητα
  • PB-0230 — Καθαρότητα πεπτιδίων και HPLC
  • Τι είναι ένα Certificate of Analysis;

Προτάσεις εσωτερικών συνδέσμων:

  • Σύνδεσμος προς το PB-0230 σχετικά με τη διαφορά μεταξύ HPLC και MS
  • Σύνδεσμος προς το PB-0229 σχετικά με την ανάλυση ανά παρτίδα
  • Σύνδεσμος προς τη σελίδα COA με τα αποτελέσματα φασματομετρικού ελέγχου μάζας
  • Σύνδεσμος προς τη συλλογή ερευνητικών πεπτιδίων
  • Σύνδεσμος προς τη σελίδα σχετικά με την ανεξάρτητη εργαστηριακή ανάλυση
Επιστροφή στο ιστολόγιο

Υποβάλετε ένα σχόλιο

Έχετε υπόψη ότι τα σχόλια χρειάζεται να λάβουν έγκριση προτού δημοσιευτούν.