Tegenionen bij peptiden: acetaat, chloride en TFA

Ionene ved peptider: acetat, klorid og TFA

For syntetiske forskningspeptider snakker man ofte om renhet, molekylmasse og peptidinnhold. Mindre synlige, men analytisk viktige, er motasjonsioner.

Peptider kan under syntese og rensing foreligge som saltformer. Da har positivt eller negativt ladede grupper på peptidet med seg et ion med motsatt ladning. Disse ionene kalles motasjonsioner.

Vanlige motationer i peptider er:

  • acetat;
  • klorid;
  • trifluoracetat, forkortet TFA.

Motationer kan påvirke:

  • total masse;
  • netto peptidinnhold;
  • løselighet;
  • pH i løsninger;
  • analytisk tolkning;
  • batchsammenligning.

En HPLC-renhet på 99 % sier vanligvis ikke noe direkte om mengden motationer. Derfor må motationer forstås separat og, når det er relevant, analyseres separat.

Hva er et motion?

Et motion er et ion som kompenserer for den elektriske ladningen til et molekyl.

Peptider inneholder ofte ladede grupper, for eksempel:

  • aminogrupper;
  • karboksylgrupper;
  • sidekjeder i ladede aminosyrer.

Når et peptid har netto positiv ladning, kan et negativt motion være til stede.

Når et peptid har netto negativ ladning, kan et positivt motion være til stede.

For mange peptidsalter dreier det seg først og fremst om negative motationer som er knyttet til positivt ladede grupper.

Hvorfor har peptider motationer?

Motationer oppstår ofte som følge av produksjons- og rensemetodene som brukes.

Under peptidproduksjon kan syrer, buffere og ioniske reagenser brukes.

Eksempler er:

  • trifluoreddiksyre under RP-HPLC;
  • eddiksyre for acetatform;
  • saltsyre for kloridform.

Etter rensing og lyofilisering kan disse ionene delvis bli værende i sluttmaterialet.

Det betyr ikke automatisk at produktet er dårlig. Det betyr at peptidet foreligger i en bestemt saltform.

Acetat som motion

Acetat er ionet i eddiksyre.

Peptider i acetatform brukes ofte når man ønsker en lavere TFA-belastning.

Acetat kan være relevant for:

  • saltform;
  • pH-egenskaper;
  • analytisk massebalanse;
  • peptidinnhold.

Acetat bidrar til den totale tørre massen, men er ikke en peptidkjede.

Derfor kan det netto peptidinnholdet være lavere enn den totale vialvekten.

Klorid som motion

Klorid er det negative ionet i saltsyre.

Noen peptider leveres som hydrokloridsalt.

Klorid kan påvirke:

  • ionestyrke;
  • oppløselighet;
  • pH;
  • total masse.

Klorid bidrar også til den totale massen, men ikke til den netto peptidkjeden.

TFA som motion

TFA står for trifluoracetat.

TFA brukes mye i peptidkjemi og RP-HPLC fordi det kan gi gode kromatografiske egenskaper.

Det kan bidra til:

  • toppform;
  • separasjon;
  • ionepardannelse;
  • rensing.

TFA kan imidlertid også bli værende i sluttmaterialet som motion.

Derfor velges det i noen bruksområder ionebytte til acetat eller klorid.

Hvorfor er TFA analytisk viktig?

TFA kan bidra relativt mye til den totale massen.

Når et peptid har flere positive ladningssteder, kan flere TFA-ioner være til stede.

Dette kan påvirke:

  • netto peptidinnhold;
  • massebalanse;
  • konsentrasjonsberegninger;
  • tolkning av vialinnhold.

Et peptid kan derfor ha svært høy HPLC-renhet og likevel inneholde en betydelig andel motioner.

Motationer og HPLC-renhet

HPLC-renhet beskriver vanligvis den relative kromatografiske hovedtoppen.

Motationer vises ikke alltid på samme måte i en standard HPLC-metode for peptider.

Derfor betyr:

99 % HPLC-renhet

ikke automatisk:

99 % netto peptidinnhold

Motationer må tas med separat ved kvantitativ vurdering.

Motationer og peptidanalyse

Ved en peptidanalyse måles den faktiske mengden peptid.

Motationer kan være viktige her, fordi de bidrar til totalvekten.

En korrekt analyse kan skille mellom:

  • bruttovekt av det frysetørkede materialet;
  • netto mengde peptid;
  • vanninnhold;
  • mot­ioninnhold;
  • øvrige komponenter.

Derfor utfyller analyse, fuktighetsanalyse og motionanalyse hverandre.

Hvordan analyseres motioner?

Mulige metoder er:

  • ionekromatografi;
  • kapillærelektroforese;
  • NMR;
  • elementanalyse;
  • massebalansemetode;
  • spesifikk TFA-analyse.

Valgt metode avhenger av motionet og ønsket nøyaktighet.

Hva er ionekromatografi?

Ion­ekromatografi er en analytisk teknikk for å separere og måle ioner.

Denne metoden kan blant annet brukes til:

  • klorid;
  • acetat;
  • trifluoracetat;
  • andre små ioner.

Resultatet kan bidra til beregning av saltformen og peptidets nettoinnhold.

Motationer og løselighet

Saltformen til et peptid kan påvirke løseligheten.

Et peptid i acetatform kan oppføre seg annerledes enn det samme peptidet i TFA- eller kloridform.

Løseligheten påvirkes også av:

  • aminosyresekvens;
  • pH;
  • konsentrasjon;
  • temperatur;
  • løsemiddel;
  • ionestyrke.

Derfor må løselighet alltid vurderes produkts­pesifikt.

Motationer og pH

Når et peptid løses opp, kan motioner bidra til løsningens pH.

Acetat, klorid og TFA har ulike kjemiske egenskaper.

pH kan være relevant for:

  • stabilitet;
  • deamidering;
  • aggregering;
  • løselighet;
  • analysemetoder.

Mortioner og batchforskjeller

Innholdet av motioner kan variere mellom batcher.

Mulige årsaker er:

  • rensemetode;
  • brukt mobilfase;
  • ionebytte;
  • vasketrinn;
  • frysetørkingsprosess.

Derfor er batchspesifikk analyse viktig når motioner er relevante for forskningsformålet.

Angis motionen på et analysesertifikat?

Noen ganger, men ikke alltid.

Et analysesertifikat kan oppgi:

  • peptidform;
  • acetat;
  • klorid;
  • TFA;
  • andel motioner;
  • analyse;
  • netto peptidinnhold.

Hvis analysesertifikatet bare viser HPLC og MS, er innholdet av motioner vanligvis ikke fullstendig vurdert.

Hvorfor er dette viktig for beregninger?

Når forskere beregner hvor mye peptid som er til stede, kan forskjellen mellom brutto- og nettomasse være viktig.

For eksempel:

  • 10 mg totalt frysetørket materiale;
  • 85 % netto peptidinnhold;
  • faktisk peptidmengde: 8,5 mg.

Uten korrigering kan mengden peptid bli overvurdert.

Vitenskapelige begrensninger

Analyse av motioner avhenger av metoden som brukes.

Ikke alle rapporter spesifiserer saltformen fullstendig.

Flere ioniske komponenter kan også være til stede.

Derfor må konklusjoner baseres på faktiske analyser, ikke bare på produktnavn eller HPLC-prosent.

Sammendrag

Motioner er ioner som kompenserer for peptidenes elektriske ladning.

Vanlige eksempler er:

  • acetat;
  • klorid;
  • TFA.

De kan påvirke:

  • total masse;
  • netto peptidinnhold;
  • løselighet;
  • pH;
  • stabilitet;
  • analytisk tolkning.

Høy HPLC-renhet betyr ikke automatisk høyt netto peptidinnhold.

For en fullstendig kvalitetsvurdering må motioner vurderes sammen med HPLC, massespektrometri, analyse, restfuktighet og batchdata.

Forskningsdisclaimer

Peptideras forskningspeptider tilbys utelukkende for Research Use Only (RUO) og er beregnet på laboratorieforskning og analytiske anvendelser.

Ikke beregnet for konsum av mennesker eller dyr, diagnostisk bruk, terapeutisk bruk eller egenadministrering.

Kategori:
Peptidkunnskap & kvalitetskontroll

Relaterte interne blogger:

  • PB-0233 — Peptidanalyse
  • PB-0234 — Restfuktighet
  • PB-0230 — Peptidrenhet og HPLC
  • PB-0232 — Analysesertifikat
  • PB-0237 — Deamidering av peptider

Filnavn:
PB-0238-tegenionen-peptiden-acetaat-chloride-tfa.jpg

Alternativ tekst:
Vitenskapelig visualisering av peptidsaltformer med acetat-, klorid- og TFA-motioner i et moderne analytisk laboratorium.

Tilbake til bloggen

Legg igjen en kommentar

Merk: kommentarer må godkjennes før de publiseres.